两种不同离心方法对脐血单个核细胞回收率的影响
毕业论文3.03W
作者:罗伟琼 李沈容 邹翠贤 罗小珍 朱美玲
【关键词】 脐血
【摘要】 目的 探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法 运用6%羟乙基淀粉(HES)沉降,二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞(MNC),此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果 通过分析两种离心方法发现制备MNC时,离心力与MNC回收率有密切关系。结论 加大离心力可增加MNC的回收率。
【关键词】 脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率
【Abstract】 Objective To investigate the effect of different centrifugal methods on returns-ratio of Mononuclear cell(MNC) in umbilical cord ods After sedimentated with 6% hydroxyethyl starch(HES),two centrifugating processes was employed to separate and concentrate MNC,which was not affected by specimen volume and not polluted by lts There was significant relationship between different centrifugal force and recovery rate of lusion Recovery rate of MNC will increase by increasing centrifugal force.
【Key words】 fetal blood;mononuclear cell;centrifugation;retrieving rate
造血干细胞移植(HSCT)已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一[1,2],而采用脐血替代骨髓及外周血进行HSCT已成为近10年来HSCT领域的最重大进展之一[2,3]。最初的脐血HSCT使用的均为未经分离的全血,这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗,但因含有大量的红细胞等成熟血细胞,不但给冷冻保存带来困难,同时还可能会给移植病人造成严重的.不良后果。因此,对脐血库来讲,高效快速分离脐血造血细胞,对单个核细胞(MNC)进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题,而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以,探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此,笔者做了一些探索,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器 6%羟乙基淀粉(HES)购自美国Dupontpharma公司;无菌、无热源,含有ACD保养液三联采血袋(长春泰尔茂医用器具公司);落地式低温离心机(SORVALL-PC3C plus);血细胞计数仪:2%冰醋酸结晶紫染色,计数有核细胞数。
1.2 MNC的制备方法
1.2.1 脐血来源 40份脐血均无菌,采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科,均为足月产,胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。
1.2.2 分离提取 将采集的脐血留样1ml用计数仪将MNC计数。参照纽约脐血库操作规程[4]按6%HES∶脐血=1∶5的比例加入,并充分混匀10min,两次离心法。第一种方法以10℃ 430r/min离心6min做第一次离心;第二种方法以10℃ 460r/min离心6min做第一次离心;利用三联袋将上层富含MNC的血浆及少许RBC移入转移袋内,去除剩余的RBC,再次以10℃ 1300r/min离心12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液18~22ml,留样1ml计数MNC。
2 结果
两种离心转速与离心时间见表1;两种离心方法制备MNC获得率的比较见表2。
表1-表2 (略)
3 讨论
脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点[5~7]:富含更原始的造血细胞,增殖能力强;可进行HLA 1~3个抗原不合的同胞或无关者的移植;单份脐血中的造血细胞量可满足65%的儿童(
【关键词】 脐血
【摘要】 目的 探讨不同离心条件下对脐血造血细胞回收率的影响。方法 运用6%羟乙基淀粉(HES)沉降,二次离心法可离心脐血浓缩单个核细胞(MNC),此法具有不受标本体积大小的影响、无细菌污染的优点。结果 通过分析两种离心方法发现制备MNC时,离心力与MNC回收率有密切关系。结论 加大离心力可增加MNC的回收率。
【关键词】 脐血;造血细胞/单个核细胞;离心法;回收率
【Abstract】 Objective To investigate the effect of different centrifugal methods on returns-ratio of Mononuclear cell(MNC) in umbilical cord ods After sedimentated with 6% hydroxyethyl starch(HES),two centrifugating processes was employed to separate and concentrate MNC,which was not affected by specimen volume and not polluted by lts There was significant relationship between different centrifugal force and recovery rate of lusion Recovery rate of MNC will increase by increasing centrifugal force.
【Key words】 fetal blood;mononuclear cell;centrifugation;retrieving rate
造血干细胞移植(HSCT)已经成为迄今为止医治各种恶性血液病、肿瘤、遗传性疾病、重度放射病及重症联合免疫缺陷等顽症的最有效方法之一[1,2],而采用脐血替代骨髓及外周血进行HSCT已成为近10年来HSCT领域的最重大进展之一[2,3]。最初的脐血HSCT使用的均为未经分离的全血,这种全脐血移植虽然能减少造血干/祖细胞的损耗,但因含有大量的红细胞等成熟血细胞,不但给冷冻保存带来困难,同时还可能会给移植病人造成严重的.不良后果。因此,对脐血库来讲,高效快速分离脐血造血细胞,对单个核细胞(MNC)进行分离浓缩,最大限度地降低其终体积显得尤为重要。这不仅涉及到尽量减低造血细胞的丢失问题,而且还牵涉到降低脐血库库容的成本问题。所以,探索出一种行之有效理想的分离方法就成了该领域研究的热点。为此,笔者做了一些探索,现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器 6%羟乙基淀粉(HES)购自美国Dupontpharma公司;无菌、无热源,含有ACD保养液三联采血袋(长春泰尔茂医用器具公司);落地式低温离心机(SORVALL-PC3C plus);血细胞计数仪:2%冰醋酸结晶紫染色,计数有核细胞数。
1.2 MNC的制备方法
1.2.1 脐血来源 40份脐血均无菌,采自深圳市宝安区西乡人民医院妇产科,均为足月产,胎儿无窒息。供者均为身体健康、发育良好的非高龄产妇。
1.2.2 分离提取 将采集的脐血留样1ml用计数仪将MNC计数。参照纽约脐血库操作规程[4]按6%HES∶脐血=1∶5的比例加入,并充分混匀10min,两次离心法。第一种方法以10℃ 430r/min离心6min做第一次离心;第二种方法以10℃ 460r/min离心6min做第一次离心;利用三联袋将上层富含MNC的血浆及少许RBC移入转移袋内,去除剩余的RBC,再次以10℃ 1300r/min离心12min。去除上层血浆获得脐血有核细胞悬液18~22ml,留样1ml计数MNC。
2 结果
两种离心转速与离心时间见表1;两种离心方法制备MNC获得率的比较见表2。
表1-表2 (略)
3 讨论
脐血与骨髓及外周血相比有诸多优点[5~7]:富含更原始的造血细胞,增殖能力强;可进行HLA 1~3个抗原不合的同胞或无关者的移植;单份脐血中的造血细胞量可满足65%的儿童(
-
倾听音乐、聆听音乐、静听音乐
音乐欣赏,是人的听觉器官接触音乐作品的音响运动形式而产生的一种能动的审美活动,也是一种通过音乐形象去体验和认识社会生活的积极的思维活动。通过音乐欣赏教学,可以接触古今中外的各种题材、体裁、风格的作品,从而开阔音乐视野,懂得一些基本的音乐知识,培养高尚的...
-
“多读”是语文教学的精髓
在文章中,不论是事情的记叙,人物和情境的描写,还是事物的介绍说明,观点的阐述和议论,都直接或间接,直露或含蓄地表达着作者的思想感情倾向,对学生起思想导航和激励作用,产生美感和丰富的想象,使学生不断地受到真善美的熏陶和感染。这在多数情况下都是通过朗读来实现的,忽...
-
供电企业班组员工绩效管理探讨
近年来,供电企业在不断创新与发展中,取得了不错的效益,随之而来的就是员工的绩效考核问题越发严重。为此,我们根据供电企业的特点,从整体方面对绩效考核探索出一个完善的考核模式。在现代信息社会,电成为了人们生活中必不可少的一部分,而供电企业也因为行业的增大而对...
-
浅议体育课多班同课窘境的应对策略论文
随着学校规模的不断扩大,在同一课次、同一场地上体育课的班级数也越来越多,而由于受场地、器材等因素的影响,造成了体育课多班同课教学的窘境。一、体育课多班同课教学窘境的原因1、体育设施配备滞后,同场教学有序开展受到制约。场地、器材配备与同课教学需求的差...