冠心病痰瘀证与载脂蛋白E基因多态性关系的研究
关载脂蛋白E(apolipoprotein E, ApoE)作为脂蛋白的组成部分和功能蛋白,对血脂代谢起调节作用, 编码ApoE基因的变异是影响血浆胆固醇浓度的重要遗传因素之一。已有报道证实:不同遗传背景人群的ApoE的基因多态性通过影响脂质代谢而与冠心病(coronary heart disease, CHD)的发病密切相关[1~3]。证候是中医认识和治疗疾病的根本,冠心病患者的临床表现以血瘀证和痰瘀互阻证为多见[4]。本研究对冠心病不同证候的发生和ApoE基因多态性的相关性进行了探讨,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 病例纳入标准 选择在北京西苑医院和北京东方医院就诊的心肌梗死患者、或经冠状动脉造影及介入治疗确诊为冠心病的患者,这些患者均符合1999年美国心脏病协会AHA/WHO公布的`冠心病分型和诊断标准[5]。然后对这些患者进行中医辨证确定证候类型。痰证、血瘀证、痰瘀互阻证、气虚证、阳虚证、阴虚证、气滞证、寒凝证等参考国家技术监督局发布的《中医临床诊疗术语・证候部分》(国家标准GB/T16751.21997)。
1.2 病例排除标准 半年内曾有严重创伤或重大手术者;肾病综合征,甲状腺功能减退症,急性肝胆疾病及糖尿病患者;服用药物影响血脂代谢的患者;正在使用影响血脂代谢药物的患者。
1.3 病例资料 按上述标准纳入不同证候类型的冠心病患者共200例,其中男105例,女95例;平均年龄(63.6±5.8)岁;其中痰证20例(10%),瘀证79例(39.5%),痰瘀互阻证82例(41%),非痰非瘀证19例(9.5%);身体质量指数(body mass index, BMI)为15.1~34.3 kg/m2。另选100名健康体检者作为对照组,其中男55名,女45名;平均年龄(62.1±7.8)岁;均无冠心病症状,常规心电图及超声心动图检查正常。以上样本人群均来自北京和河北地区,汉族,无血缘关系。所有病例均作标准基线问卷调查,结果记录于按临床流行病学要求设计的表格上。医师、患者和实验研究人员之间实行盲法。
1.4 材料
1.4.1 主要试剂 血清总胆固醇(total cholesterol, TC)和总甘油三酯(total triglycerides, TG)测定试剂盒购自法国申能公司;高密度脂蛋白胆固醇(highdensity lipoprotein cholesterol, HDLC)和低密度脂蛋白胆固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol, LDLC)测定试剂盒由日本第一化学药品株式会社提供;血脂测定多项质控物由卫生部临床检验中心提供;全血DNA纯化试剂盒(Wizard genomic DNA purification kit)、Taq DNA聚合酶、dNTPs、DNA分子量Marker(PCR Marker和pBR322Hae Ⅲ Marker)以及限制性内切酶HhaI均购自美国Promega公司;丙烯酰胺和NN’甲叉双丙烯酰胺,均购自北京鼎国生物技术公司。
1.4.2 血样采集 患者空腹12 h后,静脉抽取2 ml血样,乙二胺四乙酸抗凝,用于提取DNA。
1.4.3 引物 根据Richard 等[6]设计引物,序列为P1:5’AACAACTGACCCCGGTGGCG 3’;P2:5’ ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC 3’,均由北京鼎国生物技术公司合成。
1.5 方法
1.5.1 血脂水平的测定 测定TG采用胆固醇氧化酶过氧化物酶4氨基安替比林和酚法;测定TC采用脂蛋白脂肪酶甘油磷酸氧化酶过氧化物酶4氨基安替比林和酚法(GPOPAP酶法);测定HDLC采用选择性抑制法;测定LDLC采用选择性反应法。致动脉粥样硬化指数(atherogenic index, AI)的计算公式为:AI=(TC-HDLC)/HDLC。
1.5.2 ApoE基因型的测定 采用全血DNA纯化试剂盒提取全血DNA。按《现代心脏内科学》[5]中的条件扩增ApoE基因的目的片段。反应体系:10倍缓冲液2 μl,浓度为2 mmol/L的dNTPs 2 μl,二甲基亚砜2 μl,浓度为2 μmol/L的引物各0.25 μl,2 U Taq酶,DNA模板100~200 ng,总体积20 μl。循环条件:95 ℃预变性8 min,然后95 ℃ 45 s、60 ℃ 45 s、72 ℃ 45 s,共35个循环后,72 ℃延伸8 min。经10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)检验扩增结果。取10 μl PCR产物加入10倍酶切缓冲液2 μl,小牛血清0.2 μl,浓度为10 U/μl的HhaI 0.5μl,去离子水7.3 μl。37 ℃反应4 h。产物用15% PAGE检测其基因型。
1.5.3 样品测序 随机选取各基因型的PCR产物送北京鼎国生物技术公司进行序列测定。
-
换种思维解决问题-论文
换种思维解决问题摘要:教育不是一味地批评、指责和说教,有爱和尊重的教育,才是真正的教育。教师教育理念的转变,一个温暖的转身,也许会收到意想不到的教育效果。关键词:老师;学生;失败;宽容十年前,笔者初为人师,信奉“严师出高徒”。于是谢绝温柔,整天板着面孔,冷若冰霜,...
-
有效提高英语课堂教学质量之我见
随着课程改革的深入,许多先进的教育教学理念逐渐为广大教师理解并接受,新的教学方法如同四月的鲜花竞相绽放,在课堂教学中,各地各校教改的呼声一浪高过一浪,教师们也不亦乐乎地投入到教改的大潮中,方法是多样的,但目的是单一的,那就是提高教学质量,如何提高教学质量拙见...
-
品德活动引领孩子快乐成长
品德与生活课程是一门活动型的综合课程。活动是教师教与学生学的主要形式,课程目标主要是通过学生直接参与的丰富多彩的活动与行为实践实现的。因此,在本课程中教师不再是知识的直接传授者,不是“教”教材的人,而是学生活动的支持者、合作者和指导者,是引导、激发和...
-
关于高校应用型人才培养对策研究
摘要:市场经济发展的客观要求需要大量的具有动手实践能力的应用型高级人才,地方性应用型本科大学承担着这一任务,但存在着诸多不适应的地方,通过分析六个方面的问题,提出了五个对策:明晰办学定位,确立地方高校应用型人才培养规格和目标;强化实践环节,重视创新(...