浅探超滤法对绿原酸提取率的影响

摘要： 目的 考察超滤法纯化金银花提取液的最佳条件。方法 采用超滤法（分子截留值5 000），采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量，筛选超滤压力、药液流速、循环时间3个因素的最佳条件。结果 压力控制在0.05～0.07 MPa，循环流速控制在2 d/s左右，循环时间控制在2 h内，最终纯化液干浸膏中绿原酸高达44.10 mg/g.。结论 本法是纯化金银花药材及其制剂的一种快速有效的方法。

关键词： 超滤法；金银花；绿原酸；纯化条件

　　超滤法是20世纪60年代兴起的一项膜分离新技术。国内已有人将超滤法运用到金银花的提取中，以超滤法与醇沉法相比较,实验结果显示70%醇沉法较超滤法得到的提取物多，但绿原酸得率低，超滤法较水提醇沉法能更有效地保留有效成分［1］。
　　
　　绿原酸分子量为354.3，采用超滤(分子量截留值5 000)可以除去其中的多糖、蛋白质等大分子物质。本实验对高速离心后的水提液进行超滤，用高效液相色谱法测定超滤液中绿原酸含量，以确定超滤程度，避免有效成分的损失。
　　1 仪器与试药

　　中空纤维超滤膜实验室小设备（北京旭邦膜设备有限责任公司）；RB?15蠕动泵（天津纺织工学院膜技术工程公司机械厂）；中空纤维超滤柱CLW?003（聚醚砜，50 mm×300 mm，pH值2～13，截留分子量5 000）（北京旭邦膜设备有限责任公司）；美国Agilent1100液相色谱仪系统；AL104型电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）。
　　
　　绿原酸对照品（中国生物制品检定所提供，批号110753－200212），甲醇、乙腈均为色谱纯试剂，磷酸为分析纯试剂，水为超纯水。药材购自江苏省药材公司，由中国药科大学中药学院生药学鉴定室鉴定为忍冬科植物山银花Lonicera confusa DC.的干燥花蕾或带初开的花科。
　　2 实验方法
　　2.1 绿原酸含量的测定
　　2.1.1 对照品溶液的制备 　　精密称取在50 ℃真空干燥至恒重的绿原酸对照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加体积分数为50%的.甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加体积分数为50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含绿原酸50 μg)。因绿原酸受热见光易分解，宜用棕色量瓶贮存并置4 ℃冰箱备用。
　　2.1.2 色谱条件 色谱柱YMC?Pack ODS柱（250 mm×4.6 mm）；柱温：25 ℃；流动相：乙腈?0.4%磷酸（体积比13∶87）；流速为1 mL/min；检测波长：327 nm。
　　2.1.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液(50.10 μg/mL)1,5,10,20,40 μL分别注入液相色谱仪，以绿原酸对照品的量为横坐标(x)，以绿原酸峰面积为纵坐标(y)，计算回归方程为：y=158.69x 2.1483，r=0.99998。结果表明绿原酸在0.0501～2.0040 μg范围内呈良好线性关系。
　　2.1.4 样品测定 精密吸取样品溶液1 mL于10 mL量瓶中，相应溶剂定容，摇匀，采用随行标准法。
　　2.1.5 供试品溶液的制备 提取液经0.45 μm滤膜滤过，即可。
　　2.2 超滤仪的使用
　　2.2.1 初用时的前期处理

　　①将超滤组件内的保护液放掉，储液箱内加入清洗水，水压不超过0.15 MPa，进水通过超滤组件经浓缩液口和超滤液口排出，不得小于10 min。

　　②采用质量分数0.2%～0.5%的氢氧化钠溶液循环清洗30 min。清洗时浓缩液口排液量应稍大于超滤液口的排液量。

　　③蒸馏水清洗超滤组件，至少40 min。　2.2.2 运行 样品（经高速离心后）从料液槽中经蠕动泵输入中空纤维超滤柱，其中的大分子杂质从浓缩液出口回到原样品料液槽中，而小分子药液则在压力驱动下透过超滤膜，从中空纤维外腔的透过液出口流出。如此反复循环，直到达到分离和浓缩要求。超滤过程中，压力通过调压阀和蠕动泵的转速来控制，流量通过蠕动泵的转速调节钮控制。超滤完毕，用蒸馏水等压冲洗（关闭超滤液出口）数次，至达到要求。