石蜡切片中BCL┐6抗原失活机制及修复
毕业论文2.98W
作者:张永清 黄高升日 赵一岭 王哲 闫庆国 郭英
【关键词】 抗原修复
关键词: 抗原修复;免疫组织化学;BCL-6;淋巴组织增生
摘 要:目的 探讨石蜡切片中BCL-6抗原失活机制及修复的最佳方法. 方法 淋巴组织反应性增生11例石蜡切片分别用二乙胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种与钙离子结合力不同的修复液,结合高压、微波和煮沸3种不同方法修复后,比较检出的BCL-6阳性率及强度. 结果 BCL-6阳性率由高至低依次为:EDTA0.73>柠檬酸0.45(P<0.01)>碳酸钠0.12(P<0.01),去离子水组无1例阳性.高压修复阳性率0.55>微波修复0.28和煮沸修复0.12(P<0.05).不同修复液与高压结合修复检出BCL-6阳性率及强度:EDTA与柠檬酸阳性率分别为1,0.82(P>0.05),高于碳酸钠组(0.36)和去离子水组(0)(P<0.01)组强阳性占0.82,显著高于其他各组(P<0.01). 结论 EDTA结合高压是修复BCL-6抗原的理想方法,钙离子的参与可能是甲醛固定后BCL-6抗原失活的原因之一.
Keywords:antigen retrieval;immunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferation
Abstract:AIM To study the ideal method of retrieving the antigenic activity of BCL-6in paraffin sections and the possible mechanism of the antigen ODS Paraffin-embedded sections from11cases of lymphoid reac-tive hyperplasia were retrieved respectively by four retrieving solutions with different combining power with calcium:ED-TA,citrate,sodium carbonate(SC)and deionized water(DW),which with different retrieval methods:high pressure(HP),microwaving(MW)and stove boiling(SB),and the antigenic activities were detected by LTS The positive percentage in sections retrieved by EDTA,citrate and SC were0.73, difference among the groups was significant(P<0.01);the group of DW showed all negative.0.55of HP group was positive,which was higher than0.28of MW group and0.15of SB group(P<0.05and P<0.01) positive incidences of sections retrieved by HP with EDTA and HP with citrate were1and0.82respectively,which were higher than HP with SC(0.36)and HP with DW(0)(P<0.01).0.82of HP with EDTA was intensive positive,the difference in positive intensity between HP with EDTA group and above mentioned groups was significant(P<0.01)LUSION HP with EDTA is the ideal method for retrieving antigenic activity of BCL-6by formalin-fixa-tive,suggesting that calcium may be involved in the antigen masking.
0 引言
BCL-6是位于染色体3q27原癌基因bcl-6编码的核内转录因子,由706个氨基酸组成,主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞[1] .研究证实,bcl-6剔除鼠不能形成生发中心[2] ,其基因调控区发生易位或(和)突变与B细胞淋巴瘤发生有关[3,4] ,BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生[5,6] .检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断[7] .然而,40g・L-1 甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片,分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不同的修复液,结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果,探讨BCL-6抗原失活机制及修复的理想方法.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源及处理 2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例,反应性增生淋巴结标本4例.经40g・L-1 甲醛固定24h,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,切片置60℃烤箱过夜(切片用APES胶预处理).
1.1.2 修复液及配制 1mmol・L-1 pH8.0ED-TA溶液:0.37g EDTA溶于1L蒸馏水,调pH值至8.0;10mmol・L-1 ,pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmol・L-1 pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等[9] 及Morgan等[8] 的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.
1.2 方法 高压修复参照Norton等[10] 方法:1.5L修复液入压力锅中,加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上,浸入锅内修复液中,盖压力锅阀,加热至压力锅喷气后1min,停止加热,冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等[9] 方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中,置医用微波炉内中低档加热10min,取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中,烧杯置于盛有自来水的铝锅内,电炉上加热,烧杯中温度达97℃后开始计时,15min后停止加热,冷至室温.
【关键词】 抗原修复
关键词: 抗原修复;免疫组织化学;BCL-6;淋巴组织增生
摘 要:目的 探讨石蜡切片中BCL-6抗原失活机制及修复的最佳方法. 方法 淋巴组织反应性增生11例石蜡切片分别用二乙胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种与钙离子结合力不同的修复液,结合高压、微波和煮沸3种不同方法修复后,比较检出的BCL-6阳性率及强度. 结果 BCL-6阳性率由高至低依次为:EDTA0.73>柠檬酸0.45(P<0.01)>碳酸钠0.12(P<0.01),去离子水组无1例阳性.高压修复阳性率0.55>微波修复0.28和煮沸修复0.12(P<0.05).不同修复液与高压结合修复检出BCL-6阳性率及强度:EDTA与柠檬酸阳性率分别为1,0.82(P>0.05),高于碳酸钠组(0.36)和去离子水组(0)(P<0.01)组强阳性占0.82,显著高于其他各组(P<0.01). 结论 EDTA结合高压是修复BCL-6抗原的理想方法,钙离子的参与可能是甲醛固定后BCL-6抗原失活的原因之一.
Keywords:antigen retrieval;immunohistochemistry;BCL-6;lymphoproliferation
Abstract:AIM To study the ideal method of retrieving the antigenic activity of BCL-6in paraffin sections and the possible mechanism of the antigen ODS Paraffin-embedded sections from11cases of lymphoid reac-tive hyperplasia were retrieved respectively by four retrieving solutions with different combining power with calcium:ED-TA,citrate,sodium carbonate(SC)and deionized water(DW),which with different retrieval methods:high pressure(HP),microwaving(MW)and stove boiling(SB),and the antigenic activities were detected by LTS The positive percentage in sections retrieved by EDTA,citrate and SC were0.73, difference among the groups was significant(P<0.01);the group of DW showed all negative.0.55of HP group was positive,which was higher than0.28of MW group and0.15of SB group(P<0.05and P<0.01) positive incidences of sections retrieved by HP with EDTA and HP with citrate were1and0.82respectively,which were higher than HP with SC(0.36)and HP with DW(0)(P<0.01).0.82of HP with EDTA was intensive positive,the difference in positive intensity between HP with EDTA group and above mentioned groups was significant(P<0.01)LUSION HP with EDTA is the ideal method for retrieving antigenic activity of BCL-6by formalin-fixa-tive,suggesting that calcium may be involved in the antigen masking.
0 引言
BCL-6是位于染色体3q27原癌基因bcl-6编码的核内转录因子,由706个氨基酸组成,主要表达于淋巴组织生发中心B细胞及部分T细胞[1] .研究证实,bcl-6剔除鼠不能形成生发中心[2] ,其基因调控区发生易位或(和)突变与B细胞淋巴瘤发生有关[3,4] ,BCL-6表达失调可引起细胞凋亡及弥漫性大B细胞淋巴瘤发生[5,6] .检测BCL-6表达有助于淋巴瘤的诊断和鉴别诊断[7] .然而,40g・L-1 甲醛固定后的BCL-6抗原不经修复极难检出.我们用免疫组化方法比较一组反应性增生淋巴组织石蜡切片,分别用EDTA、柠檬酸、碳酸钠及去离子水4种修复机制不同的修复液,结合高压、微波及煮沸3种常用方法的修复效果,探讨BCL-6抗原失活机制及修复的理想方法.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源及处理 2000-02/2000-06收集西京医院病理科扁桃体炎标本7例,反应性增生淋巴结标本4例.经40g・L-1 甲醛固定24h,常规石蜡包埋,4μm厚连续切片,切片置60℃烤箱过夜(切片用APES胶预处理).
1.1.2 修复液及配制 1mmol・L-1 pH8.0ED-TA溶液:0.37g EDTA溶于1L蒸馏水,调pH值至8.0;10mmol・L-1 ,pH6.0柠檬酸盐溶液、1.5mmol・L-1 pH8.0碳酸钠溶液分别参照Cattoretti等[9] 及Morgan等[8] 的方法配制;去离子水用美国Millipore公司制纯水器生产.
1.2 方法 高压修复参照Norton等[10] 方法:1.5L修复液入压力锅中,加热至沸腾.将脱蜡至水切片置于金属架上,浸入锅内修复液中,盖压力锅阀,加热至压力锅喷气后1min,停止加热,冷水浸至室温.微波修复参照Cattoretti等[9] 方法:将脱蜡至水切片放入盛有修复液的染缸中,置医用微波炉内中低档加热10min,取出冷却至室温.煮沸修复法:将脱蜡至水切片浸入盛修复液的烧杯中,烧杯置于盛有自来水的铝锅内,电炉上加热,烧杯中温度达97℃后开始计时,15min后停止加热,冷至室温.
-
工程制国课程多媒体教学的利与弊
[论文摘要]多媒体教学是改进教学方法、改善教学效果、保障教学质量的重要手段。本文从多媒体教学在工程制图课中的应用出发,分析探讨了多媒体教学的优势和弊端,并结合教学经验,对当前多媒体教学应用提出了改进的建议,以期更好地服务与工程制图课程教学。相关论文查...
-
论基于中学生英语交际学习策略指导
论文关键词:初中英语英语交际策略指导论文摘要:本文试就中学生的英语交际学习策略指导作探析,旨在通过运用正确的教学思维模式来提高学生的语言交际和表达技能,从而提高他们的综合语言运用能力。交际策略的指导,不仅是英语课程本质功能的发展必然要求,更是提高学生语...
-
供电企业班组员工绩效管理探讨
近年来,供电企业在不断创新与发展中,取得了不错的效益,随之而来的就是员工的绩效考核问题越发严重。为此,我们根据供电企业的特点,从整体方面对绩效考核探索出一个完善的考核模式。在现代信息社会,电成为了人们生活中必不可少的一部分,而供电企业也因为行业的增大而对...
-
水泥砼路面板真空灌浆技术的应用
摘要:我国水泥砼路面有相当一部分日益老化,最为严重的病害是路面板断板,板下灌浆技术是解决该病害较好的办法。关键词:水泥混凝土路面灌浆技术应用水泥混凝土路面在我国已有多年的使用历史,是我国公路路面主要形式之一,在我国公路网构成中占有较大比重。它具有...