浅谈GC-MS检测人心血及肝脏中的巴比妥论文
巴比妥(Barbital),分子式C8H12N2O3,分子量为184.19,属于环丙二酰脲类药物,显酸性,是常见的催眠镇静药,有抑制中枢神经的作用。随着巴比妥在临床上的广泛使用,越来越多案(事)件是由此引起的,这就是建立可靠、快速、简单,满足对生物检材中的巴比妥进行检验的方法具有较好的现实意义。本文基于巴比妥的理化性质及参考文献的基础上,提出生物检材经过简单的萃取后,用GC-MS对样品进行检测的方法。
1材料与方法
1.1主要仪器和试剂
GC/MS:Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪;配有电子轰击离子源(EI)及Nest11.0化学图谱库、95%乙醇(分析纯)、乙酸乙酯(分析纯)、甲醇(色谱纯)。
1.2检材
待测样品:邹某某心血,邹某某肝脏。
1.3实验方法
1.3.1GC/MS仪器条件
离子源:EI源,离子化能量:70eV,离子源温度:230℃;四极杆温度:150℃;色谱柱:HP-5ms30m×0.25mm×0.25μm。进样口温度:280℃;传输线温度:250℃;程序升温:初温80℃保持3min,以30℃/min的速率升温到300℃,保持8min;进样方式:分流进样,分流比:10:1;载气:氦气,纯度:>99.99%,流速:1.0ml/min。
1.3.2样品前处理
取邹某某心血5mL,邹某某肝脏10g(剪碎),分别置于50mL具塞塑料离心管中,均加入LpH=3~4的95%乙醇15m浸泡30min,然后置于3000r/min离心机离心3min,取出上清液分别放置于两个蒸发皿中,残渣仍然用pH=3~4的95%乙醇30mL浸提二次,并把后二次的上清液合并于同一个蒸发皿中,90℃水浴锅上蒸发皿挥干,取下,冷却一直至室温。
用=3~5的盐酸水溶液10mLpH少量多次的洗涤蒸发皿上的挥干物,并转移至50mL具塞塑料离心管,用乙酸乙酯25mL萃取二次,二次萃取液都置于同一蒸发皿中,把蒸发皿放在90℃水浴锅上挥干,取下蒸发皿,冷却至室温。
多次地洗涤蒸发皿中的萃取物质用少量1mL色谱纯甲醇,放进样瓶中,邹某某待测心血便可以得到,以及待测肝脏。
1.3.3分析检测
邹某某的待测心血,邹某某的待测肝脏,空白对照样品(色谱纯甲醇)分别进样1μL,进行分离分析,用GC/MS在1.3.1条件下。
2结果
2.1心血的检测结果
经检验色谱纯甲醇空白对照样品TIC图中6.433min处未出峰,说明色谱纯甲醇可以作为空白试剂使用。图1为邹某某待测心血的TIC图,TIC图中6.433min出现巴比妥的色谱峰,图2为邹某某待测心血TIC图中巴比妥色谱峰所对应的MS图,MS图中显示巴比妥的特征离子碎片为:141及156,检测结果可得出,邹某某待测心血中检出巴比妥的结论。
2.2肝脏的检测结果
图3为邹某某待测肝脏的TIC图,TIC图中6.481min出现巴比妥的色谱峰,图4为邹某某待测肝脏TIC图中巴比妥色谱峰所对应的MS图,MS图中显示巴比妥的特征离子碎片为:141及156,检测结果可得出,邹某某待测肝脏中检出巴比妥的结论。
3讨论
TIC图均显示分离效果好,背景干扰小,虽然心血及肝脏中定性的保留时间存在一定的差异,但是误差<1%,定性的准确性是不影响的,巴比妥的特征离子碎片再ms图中显示,及巴比妥的分子结构,与nest11.0化学图谱库中巴比妥的匹配度>95%,这些都充分证明了定性的'可靠性及所建方法的可行性。
经案情调查,邹某某(男,15岁),在校期间被人打殴损伤,诊断为颅骨骨折,颅内出血,2016年某日上午突然死亡;据了解邹某某在住院期间确实用过巴比妥药物,本文在邹某某的心血及肝脏中均检出巴比妥,与案情相符,这也说明方法真实、可靠,可用人心血及肝脏中巴比妥的检测。
4结论
本文根据巴比妥显酸性的性质,采用95%酸性乙醇沉淀蛋白后,在酸性条件下进行检材前处理,用GC-MS检测人心血及肝脏中的巴比妥;所建方法简便、快速、可靠,巴比妥用于定性的保留时间为6.530min,特征离子碎片为:141及156。
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