FQ-PCR法检测外周血单个核细胞内HCVRNA含量的相关实验条件分析
全部作者: | 钟华平 赵伟 沈玲 薛蓉 吴引伟 殷艳天 |
第1作者单位: | 东南大学 |
论文摘要: | 目的 对采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测外周血单个核细胞内(PBMC)HCVRNA含量过程中洗涤细胞的方法及标本保存的条件进行探索。方法分别于同1天内收集分离6例(A组)和11例(B组)血清HCVRNA阳性慢性丙型肝炎患者PBMC,A组分别采用常规法及改良法即在第2 次离心前加入10g/LRNA酶50μl处理15分钟洗涤细胞5次,并留取每次洗涤液及细胞;B组采用改良法洗涤细胞3次后并把细胞分成2份,分别作为新鲜组和-20℃冻存组,然后采用离心柱型RNA提取法和FQ-PCR检测洗涤液和细胞中HCVRNA含量。结果①洗涤完3次时,常规法有1份洗涤液HCV为阳性,改良法均为阴性;与第1次洗涤液相比,改良法再洗涤1次的病毒含量下降幅度明显高于常规法;②新鲜组与冻存组HCVRNA含量不存在明显差异,Spearman'S相关系数为0.93,P<0.01结论 洗涤PBMC以采用改良法洗涤3次为宜;-20℃简易冻存6周的'PBMC标本仍可用于FQ-PCR检测。 |
关键词: | 实时荧光定量PCR; 外周血单个核细胞; 丙型肝炎病毒; 远程下载 论文(免费PDF论文全文) |
发表日期: | 2007年09月25日 |
同行评议: | 1.原文“affiliated with”应“affiliated to”。见牛津现代高级英汉辞典。2.原文“To explore that a method of ......”可为“To examine a methodof ......”。此实验方法在国内外已开展多年。3.原文“然而本实验并未出现这种现象,可能与离心参数不同、细胞内病毒含量低和样本量小等有关(见讨论第1节)”。建议:(1)在科技论文中尽可能不用“可能”2字;(2)本研究的样本量确实是小,能否增加1定的样本数量。 |
综合评价: | |
修改稿: | |
注:同行评议是由特聘的同行专家给出的评审意见,综合评价是综合专家对论文各要素的评议得出的数值,以1至5颗星显示。 |
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