构建重组表达质粒pBV220／mhNT-4及mhNT-4在大肠杆菌中的表达

全部作者：	张华赵家良胡海涛
第1作者单位：	中国医学科学院北京协和医院眼科
论文摘要：	利用基因重组技术将mhNT-4亚克隆到表达载体pBV220，构建重组表达质粒pBV220／mhNT-4，诱导表达mhNT-4成熟蛋白，鉴定mhNT-4的.生物活性。将经鉴定的pGEM-T Easy /mhNT-4克隆用限制性内切酶EcoR I,BamH I消化，琼脂糖凝胶电泳回收片断。酶切原核高表达载体pBV220，用限制性内切酶EcoR I,BamH I消化，琼脂糖凝胶电泳回收线性化载体。用T4 DNA连接酶连结两个回收片断，构建重组质粒pBV220／mhNT-4。限制性内切酶消化，琼脂糖凝胶电泳鉴定重组质粒。经鉴定的重组质粒pBV220／mhNT-4转染大肠杆菌DH5α，温度诱导表达mhNT-4蛋白。SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳技术分离表达的mhNT-4蛋白。制备8~9d鸡胚，分离并培养背根神经节(DRG)细胞。分别加入回收的表达蛋白和牛血清白蛋白，培养鸡胚背根神经节DRG细胞，检测mhNT-4生物活性。重组表达质粒pBV220／mhNT-4构建正确，表达框架未发生改变。成功诱导表达、分离了mhNT-4成熟蛋白。表达蛋白组可见大量神经突起自神经节组织快周缘向4周呈放射状长出，对照组未见神经突起长出。mhNT-4成熟蛋白具有良好的生物活性。本研究为进1步开展mhNT-4基因治疗青光眼提供了资料。
关键词：	人神经营养素-4成熟蛋白基因（mhNT-4）；基因重组；表达载体；生物活性远程下载论文(免费PDF论文全文)
发表日期：	2006年10月23日
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